Clickchemistrytools貨號(hào)1037產(chǎn)品DBCO Magnetic Beads操作說(shuō)明

一、產(chǎn)品基礎(chǔ)信息

• 貨號(hào)：1037?1（1 mL），1037?5（5      mL）

• 濃度：10 mg/mL，粒徑 0.8–1 μm，DBCO 基團(tuán)密度≥30 nmol/mg

• 反應(yīng)原理：無(wú)銅點(diǎn)擊化學(xué)（SPAAC），DBCO 特異性與疊氮（?N?）標(biāo)記蛋白 / 分子共價(jià)偶聯(lián)

• 用途：捕獲富集疊氮修飾蛋白、免疫沉淀、細(xì)胞分選、蛋白互作、神經(jīng) / 巨噬細(xì)胞相關(guān)蛋白純化

• 儲(chǔ)存：2–8 ℃，嚴(yán)禁凍存，使用前顛倒充分重懸

二、推薦緩沖液（通用）

• 結(jié)合 / 洗滌緩沖液：PBS（pH 7.2–7.4），可加 0.01% Tween?20、1% BSA 降低非特異結(jié)合

• 禁止：高濃度尿素、強(qiáng)還原劑、含游離疊氮離子體系

三、標(biāo)準(zhǔn)操作步驟（捕獲疊氮標(biāo)記蛋白）

1. 磁珠預(yù)處理（關(guān)鍵）

1.1取所需體積磁珠（常規(guī) 20–50 μL，200–500 μg），摩爾比為磁珠與疊氮分子（如1:1至5:1）

磁力架上靜置 1–2 min，棄上清

1.2加入等量 PBS 洗滌，吹打重懸，磁分離棄上清，重復(fù) 2 次

1.3用結(jié)合緩沖液重懸磁珠備用

2. 結(jié)合反應(yīng)（無(wú)銅、溫和條件）

2.1加入疊氮標(biāo)記的蛋白 / 細(xì)胞裂解液樣本

2.2室溫旋轉(zhuǎn)孵育1–2 h；或 4 ℃旋轉(zhuǎn)過(guò)夜，效率更高

2.3磁分離，棄未結(jié)合上清

3.洗滌去除雜蛋白

3.1PBS?T（含 0.01% Tween?20）洗滌3 次，每次充分重懸→磁分離棄上清，去除非特異吸附

4. 目標(biāo)分子洗脫 / 下游應(yīng)用

4.1蛋白 WB / 質(zhì)譜：加 SDS 上樣緩沖液，95 ℃煮沸 5–10 min，磁分離取上清

4.2保留磁珠?蛋白復(fù)合物：直接用于后續(xù)共沉淀、互作檢測(cè)

四、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

• 全程禁止銅離子，否則破壞無(wú)銅點(diǎn)擊反應(yīng)

• 磁珠易聚集，每次使用前充分顛倒重懸，禁止劇烈高速離心

• 樣本 pH 維持 6–8，避免強(qiáng)酸強(qiáng)堿

• 洗滌充分，降低背景，適配低豐度蛋白檢測(cè)